应用背景
酵母表达系统分为酿酒酵母表达系统和甲醇营养性酵母表达系统,后者(如毕赤酵母)是目前应用广泛的酵母表达系统。酵母表达系统是工业微生物中应用较广泛的系统。酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点,既有原核表达的周期短、成本低、易操作,适合工业级别放大培养等优点;同时具备了真核细胞对蛋白的糖基化修饰,空间折叠等能力,使得蛋白折叠保真性和可溶性都大幅度提高,是重组蛋白表达的强有力工具。
毕赤酵母体系是真核体系中操作简单、成本低廉的系统,在蛋白加工、折叠、翻译后修饰等方面具有诸多优势,在毕赤酵母体系中蛋白转录后糖基化所增加的寡糖链长度(平均每个支链8-14 个甘露糖残基)非常接近高等真核生物的结构,活性几率大大高于原核体系。与其他表达系统的基因存在于游离质粒上不同,它的表达质粒是通过同源重组整合在基因组上的,转化简单(不需要病毒原液),表达菌株可以长时间保持(大于10年)而不失活。与其他表达系统相比,具有使用简单、表达量高、可大规模生产、相对低廉的价格、有很多真核的翻译后修饰和加工、大蛋白能较好地折叠等特点。适合于稳定表达有功能的外源蛋白质,而且可大规模发酵,是理想的重组真核蛋白生产制备工具。
高压均质使酵母细胞破壁,酵母中更多的自溶物就更容易的释放到水环境中,进一步的抽提量也就增加。高压均质处理后酵母细胞壁破损使胞内物不再受细胞壁的限制,酶和底物的反应空间更加充足,反应产物的抑制作用减小,既增大了酶的活性,又保持酶的活力,还加快反应速度。酵母菌一般需要1300bar的压力破碎3-4遍,破碎率可以达到 90%以上,常见的典型应用:HPV疫苗、诺如病毒疫苗、乙肝疫苗、手足口病疫苗等。
高压细胞破碎仪是生物工程中一种重要的实验、生产设备,能够快速、高效地将细胞破碎并释放其胞内物质。高压细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,均质、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反应等功能,故广泛应用于生物工程、基因工程、细胞工程、酶工程、蛋白质工程、微生物工程、生物化学、表面化学、药物化学、生物医药、生物制品等等实验室研究或企业生产。高压细胞破碎仪是胞内物质(蛋白质、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均质主要的样品制备手段,可用于蛋白质研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic细胞等,是生物工程及生物制药等行业研发及生产的标准设备。