应用背景
电镜下轮状病毒呈二十面对称球形颗粒,三层衣壳(外壳、内壳、核壳),外型似车轮,故命名为“轮状病毒”ERotavirus)。轮状病毒属呼肠孤病毒科,病毒基因组为含11节段的双链RNA。主要结构蛋白为(外壳VP4和VP7,内壳VP6)。1973年由澳大利亚科学家Bishop首次发现,人轮状病毒是婴幼儿腹泻最重要的病毒病原。轮状病毒疫苗是预防轮状病毒肠炎的疫苗,轮状病毒疫苗并非灭活疫苗,而是减毒活疫苗,轮状病毒疫苗属于减毒的重组活疫苗。
20世纪60年代以后,用细胞作为病毒培养基质制备的狂犬病疫苗逐渐取代了神经组织和禽胚疫苗,其中细胞培养基质主要有动物细胞(包括原代地鼠肾细胞、鸡胚细胞及传代Vero细胞)和人二倍体细胞。轮状病毒活疫苗具有传代历史清楚、病毒抗原式清楚、毒种遗传性状稳定、利用病毒的种属差异,对人类天然减毒、试验减毒选育,进一步降低了毒性等安全性。人和动物轮状病毒的VP6具有相同的抗原性,且动物毒株比人RV毒株易于在组织培养中生长,且对人天然减毒,这是研究轮状病毒减毒活疫苗的研制理论基础。利用动物轮状病毒对人无致病性并有良好免疫原性(与HRV有共同抗原)预防人类A群轮状病毒腹泻,这是轮状病毒疫苗苗的制备原理。经技术处理后HAV毒力较弱,不会造成排毒期相互感染,这是减毒活疫苗较灭活苗优越性。
通过菌种转基因的方式表达蛋白或核酸等物质,然后经过破壁后提取细胞内酶、蛋白质等活性的产物是生物工程中的重要技术。首先富集菌体,收集胞内产物的细胞或菌体。然后进行细胞重悬,用适当的缓冲液或培养液将离心或沉降等方法得到的固体(沉淀、细胞、活性物质等等)重新悬浮。其次进行细胞破碎,使产物转移到液相中。最后收集含生化物质的液相,进行碎片分离,分离除去细胞、菌体、细胞碎片、蛋白质的沉淀物和絮凝体等固体悬浮物,得到上清液或滤液。然后从澄清的滤液中提取胞内产物,从细胞裂解物中获取目标产物。
高压细胞破碎仪是生物工程中一种重要的实验、生产设备,能够快速、高效地将细胞破碎并释放其胞内物质。高压细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,均质、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反应等功能,故广泛应用于生物工程、基因工程、细胞工程、酶工程、蛋白质工程、微生物工程、生物化学、表面化学、药物化学、生物医药、生物制品等等实验室研究或企业生产。高压细胞破碎仪是胞内物质(蛋白质、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均质主要的样品制备手段,可用于蛋白质研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic细胞等,是生物工程及生物制药等行业研发及生产的标准设备。