细胞破壁方法选哪个?
发布日期:2023-09-11 浏览次数:311次
细胞破壁的方法很多,按照是否存在外加作用力,可分为机械法和非机械法,故细胞破碎原理可规纳为机械破碎原理和非机械破碎原理两大类。影响机械法破碎的因素有细胞的大小和形状、细胞壁的厚度、聚合物交联程度。显然,细胞个体小、球形、壁厚、聚合物交联程度高是最难破碎的;影响非机械法破碎的因素有细胞壁、膜的组成和结构。了解细胞壁的组成和结构,就可以选择合适的溶菌酶和化学试剂,以及在使用多种酶或化学试剂相结合时确定其使用的顺序。
物理破碎法的缺点是高能、高温、高噪音、高剪切力,易使产品变形失活;非专一性,胞内产物均释放,分离纯化困难;细胞碎片大小不一,难分离。化学破碎法缺点是费用高;引起新的污染,尤其是其他化学方法;一般只有有限的破碎,常需与其他物理法连用。酶解需要选择适宜的酶和酶系统,并要决定特定的反应条件,还常附加其他的处理,如辐照、加高浓度盐及EDTA,或者利用生物因素等促使微生物对酶解作用敏感,以获得一定的效果。
破碎方法选择的一般原则是提取产物在细胞质内,用机械法破碎;提取产物在细胞膜附近,用化学法;提取产物与细胞膜和细胞壁结合,可采用化学法和机械法结合的方法。选择合适的破碎方法需要考虑细胞的数量、目的产物对破碎条件(温度、化学试剂、酶等)的敏感性;破碎程度及破碎速度;细胞壁的坚韧长度;产物的性质如耐酸、耐热等。每一步应注意全面考虑操作度、对细胞的剪切程度、蛋白酶的失活作用等。
综上所述,细胞破壁的方法很多,细胞破碎机的原理通常涉及机械破碎、超声波破碎、高压破碎和化学破碎等方法。对比传统的细胞破壁方法,高压细胞破壁的效果好,其破壁率与提取率都相对较高,而且其操作的设备简单,可大规模操作,操作成本低,周期较短。此过程中只发生物质状态的变化,而无化学反应变化;是物质量的分配,而不是质的飞跃。